تبلیغات
کشاورزی نوین و پایدار - استخراج، خالص سازی و آنالیز هورمون های اکسین (IAA) و آبسیزیک اسید (ABA)
 
کشاورزی نوین و پایدار

به نظر من استخراج و خالص سازی هورمون ها یکی از سخت ترین، زمان بر ترین و در عین حال جذاب ترین آزمایش های فیزیولوژیک محسوب می شود. به یاد می آورم زمانی که در پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی کرج به اتفاق دوست عزیزم آقای دکتر محسن سعیدی کار بر روی هورمون ها را شروع کردیم روزها و هفته ها نتوانستیم آزمایشگاه را ترک کنیم، شاید برایتان عجیب باشد ولی عین واقعیت است! ضمن تشکر فراوان از استاد بزرگوارم جناب آقای دکتر فواد مرادی عضو محترم هیات علمی پژوهشکده و همچنین سرکار خانم مهندس مهشید رحیمی فرد، در زیر پروتکل اپتیمایز شده هورمون ها را می آورم.

 

آماده سازی محلول ها:

1. محلول استخراج: 25/0 گرمButylated hydroxytoluen و 5/0 گرم Sodium ascorbate (یا 44/0 گرم (Ascorbic acid در متانول 90% با درجه HPLC حل گردیده و به حجم یك لیتر رسانیده شد.

  1. بافر فسفات 5/0 مولار: 8 گرم NaCl، 2/0 گرمKH2PO4و 6/9 گرم Na2HPO4.12H2O در آب مقطر حل شده و به حجم یك لیتر رسید.
  2. پتاس 2/0 نرمال: 122/1 گرمKOH را در آب مقطر حل کرده و به حجم صد میلی­لیتر رسانیده شد.
  3. هیدروكلریك اسید 2/0 نرمال: 66/1 میلی لیتر HCl 37% با دانسیته Kg/L ۱/۱۹ را به آب مقطر افزوده و سپس به حجم صد میلی­­لیتر رسانیده شد.
  4. متانول

روش كار:

1. 2 گرم از ماده گیاهی تازه برداشته و با اضافه كردن ml ۴۰ محلول استخراج در هاون چینی خرد گردید.

2. نمونه­های خرد شده در تاریكی و دمایoC ۴به مدت حداقل 16 ساعت نگهداری شد تا عمل انحلال هورمون­ها به خوبی صورت گیرد.

  1. نمونه­های خرد شده راتوسط كاغذ صافی واتمن شماره 1 فیلتر نموده و بافت­های باقیمانده بر روی فیلتر سه بار توسط محلول استخراج شستشو گردید.
  2. متانول اضافی را توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ تبخیر کرده و سپس هم حجم محلول باقیمانده، بافر فسفات 5/0 مولار اضافه شد. سپس با اضافه كردن پتاس 2/0 نرمالpH محلول به 5/8 رسانیده شد.
  3. به محلول بدست آمده به میزان برابر اتیل­استات اضافه شد تا بخشی از ناخالصی­ها در آن حل شود. در این مرحله محلول دو فازی گردید. این محلول را ورتكس کرده و فاز بالایی (اتیل­استات) را دور ریخته شد و باقیمانده اتیل­استات توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ تبخیر شد.
  4. pH بخش آبكی را توسط هیدروكلریك اسید 2/0 نرمال به حدود 5/2 رسانده و دوباره به میزان برابر اتیل­استات اضافه گردید، با این تفاوت كه این بار فاز اتیل­استات نگه داشته ­شد.
  5. فاز اتیل­استات اسیدی را توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ خشك شده بود و باقیمانده بلافاصله در ml ۰/۵ متانول حل نموده شد.
  6. نمونه را از فیلتر پلی­تترافلوئورواتیلن 45/0 عبور داده و سپس به ستون HPLC تزریق گردید.
  7. اجزای محلول بدست آمده توسط دستگاه HPLC با ستون C18، شدت جریان ml/min ۰/۷ و حلال استیك­اسید 2/0% و متانول 100% به نسبت 50 :50 در دمای oC ۴۰ جدا گردیدند.

شرایط آنالیز با HPLC :

دتکتور : UV

فاز متحرک : استیک اسید 2/0 درصد و متانول 100% (v/v 50:50 )

دمای ستون : 40 درجه سانتی گراد

نوع ستون : C18

شدت جریان : 7/0میلی لیتر در دقیقه

منبع:

حسیبی، پ. 1386. بررسی فیزیولوژیکی اثر تنش سرما در مرحله­ی گیاهچه­ای ژنوتیپ­های مختلف برنج. رساله دکتری دانشگاه شهید چمران اهواز. ص.145.





نوع مطلب :
برچسب ها :
لینک های مرتبط :
سه شنبه 1397/05/23 02:29 ق.ظ

You definitely made the point!
buy super viagra online viagra usa rx viagra online usa online pharmacy sildenafil or viagra silagra buying viagra from canada where can i buy a viagra buy viagra now online buy viagra 50mg
یکشنبه 1397/05/21 07:45 ب.ظ

Awesome information. Appreciate it!
online cialis cialis authentique suisse cialis 10 doctissimo cialis 100 mg 30 tablet cialis super acti only here cialis pills cialis authentique suisse link for you cialis price we choice free trial of cialis side effects for cialis
دوشنبه 1397/03/7 01:29 ق.ظ

Cheers, Terrific stuff.
generic cialis 20mg uk cialis tadalafil online generic cialis review uk cialis 5 mg para diabeticos order generic cialis online cialis pills boards cialis 5 mg buy free generic cialis legalidad de comprar cialis cialis without a doctor's prescription
سه شنبه 1397/02/4 01:08 ق.ظ

Kudos. Plenty of material.

viagra buy uk buy generic viagra online safely viagra mail order buy viagra jelly viagra usa online buy viagra now buy viagra online online generic viagra pharmacy buy viagra canada online viagra cheap buy
جمعه 1397/01/17 05:25 ب.ظ

You actually suggested it effectively!
cialis 30 day trial coupon free cialis overnight cialis tadalafil cialis canada cialis 5mg prix cialis professional from usa cialis e hiv cialis generico milano low cost cialis 20mg buy generic cialis
جمعه 1397/01/3 12:45 ب.ظ

Terrific material. Thanks!
can i take cialis and ecstasy we recommend cialis info low dose cialis blood pressure buy cialis cialis 100 mg 30 tablet cialis rezeptfrei sterreich cialis wir preise if a woman takes a mans cialis cialis prezzo di mercato where do you buy cialis
یکشنبه 1396/12/27 08:07 ب.ظ

Reliable knowledge. Appreciate it!
cialis cuantos mg hay venta de cialis canada link for you cialis price click now buy cialis brand cialis 5 mg generico cialis mexico cialis et insomni cialis with 2 days delivery cialis tadalafil online we use it cialis online store
جمعه 1396/09/17 05:32 ق.ظ
Hey there! This is kind of off topic but I need some guidance from an established
blog. Is it very hard to set up your own blog? I'm not very techincal but I can figure things
out pretty fast. I'm thinking about creating my own but I'm
not sure where to begin. Do you have any points or suggestions?
With thanks
دوشنبه 1396/06/27 05:15 ق.ظ
Hello There. I found your blog the usage of msn. That is a really smartly written article.
I will be sure to bookmark it and come back to read extra
of your helpful info. Thanks for the post. I will definitely comeback.
جمعه 1396/04/16 10:16 ب.ظ
What's up i am kavin, its my first time to commenting anyplace,
when i read this post i thought i could also create comment due to
this sensible post.
جمعه 1396/02/22 11:38 ق.ظ
Terrific work! This is the type of information that should be
shared around the internet. Disgrace on the seek engines for
no longer positioning this submit upper! Come on over and discuss
with my web site . Thank you =)
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر


آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :