تبلیغات
کشاورزی نوین و پایدار - استخراج، خالص سازی و آنالیز هورمون های اکسین (IAA) و آبسیزیک اسید (ABA)
 
کشاورزی نوین و پایدار

به نظر من استخراج و خالص سازی هورمون ها یکی از سخت ترین، زمان بر ترین و در عین حال جذاب ترین آزمایش های فیزیولوژیک محسوب می شود. به یاد می آورم زمانی که در پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی کرج به اتفاق دوست عزیزم آقای دکتر محسن سعیدی کار بر روی هورمون ها را شروع کردیم روزها و هفته ها نتوانستیم آزمایشگاه را ترک کنیم، شاید برایتان عجیب باشد ولی عین واقعیت است! ضمن تشکر فراوان از استاد بزرگوارم جناب آقای دکتر فواد مرادی عضو محترم هیات علمی پژوهشکده و همچنین سرکار خانم مهندس مهشید رحیمی فرد، در زیر پروتکل اپتیمایز شده هورمون ها را می آورم.

 

آماده سازی محلول ها:

1. محلول استخراج: 25/0 گرمButylated hydroxytoluen و 5/0 گرم Sodium ascorbate (یا 44/0 گرم (Ascorbic acid در متانول 90% با درجه HPLC حل گردیده و به حجم یك لیتر رسانیده شد.

  1. بافر فسفات 5/0 مولار: 8 گرم NaCl، 2/0 گرمKH2PO4و 6/9 گرم Na2HPO4.12H2O در آب مقطر حل شده و به حجم یك لیتر رسید.
  2. پتاس 2/0 نرمال: 122/1 گرمKOH را در آب مقطر حل کرده و به حجم صد میلی­لیتر رسانیده شد.
  3. هیدروكلریك اسید 2/0 نرمال: 66/1 میلی لیتر HCl 37% با دانسیته Kg/L ۱/۱۹ را به آب مقطر افزوده و سپس به حجم صد میلی­­لیتر رسانیده شد.
  4. متانول

روش كار:

1. 2 گرم از ماده گیاهی تازه برداشته و با اضافه كردن ml ۴۰ محلول استخراج در هاون چینی خرد گردید.

2. نمونه­های خرد شده در تاریكی و دمایoC ۴به مدت حداقل 16 ساعت نگهداری شد تا عمل انحلال هورمون­ها به خوبی صورت گیرد.

  1. نمونه­های خرد شده راتوسط كاغذ صافی واتمن شماره 1 فیلتر نموده و بافت­های باقیمانده بر روی فیلتر سه بار توسط محلول استخراج شستشو گردید.
  2. متانول اضافی را توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ تبخیر کرده و سپس هم حجم محلول باقیمانده، بافر فسفات 5/0 مولار اضافه شد. سپس با اضافه كردن پتاس 2/0 نرمالpH محلول به 5/8 رسانیده شد.
  3. به محلول بدست آمده به میزان برابر اتیل­استات اضافه شد تا بخشی از ناخالصی­ها در آن حل شود. در این مرحله محلول دو فازی گردید. این محلول را ورتكس کرده و فاز بالایی (اتیل­استات) را دور ریخته شد و باقیمانده اتیل­استات توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ تبخیر شد.
  4. pH بخش آبكی را توسط هیدروكلریك اسید 2/0 نرمال به حدود 5/2 رسانده و دوباره به میزان برابر اتیل­استات اضافه گردید، با این تفاوت كه این بار فاز اتیل­استات نگه داشته ­شد.
  5. فاز اتیل­استات اسیدی را توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ خشك شده بود و باقیمانده بلافاصله در ml ۰/۵ متانول حل نموده شد.
  6. نمونه را از فیلتر پلی­تترافلوئورواتیلن 45/0 عبور داده و سپس به ستون HPLC تزریق گردید.
  7. اجزای محلول بدست آمده توسط دستگاه HPLC با ستون C18، شدت جریان ml/min ۰/۷ و حلال استیك­اسید 2/0% و متانول 100% به نسبت 50 :50 در دمای oC ۴۰ جدا گردیدند.

شرایط آنالیز با HPLC :

دتکتور : UV

فاز متحرک : استیک اسید 2/0 درصد و متانول 100% (v/v 50:50 )

دمای ستون : 40 درجه سانتی گراد

نوع ستون : C18

شدت جریان : 7/0میلی لیتر در دقیقه

منبع:

حسیبی، پ. 1386. بررسی فیزیولوژیکی اثر تنش سرما در مرحله­ی گیاهچه­ای ژنوتیپ­های مختلف برنج. رساله دکتری دانشگاه شهید چمران اهواز. ص.145.





نوع مطلب :
برچسب ها :
لینک های مرتبط :
دوشنبه 1396/06/27 05:15 ق.ظ
Hello There. I found your blog the usage of msn. That is a really smartly written article.
I will be sure to bookmark it and come back to read extra
of your helpful info. Thanks for the post. I will definitely comeback.
جمعه 1396/04/16 10:16 ب.ظ
What's up i am kavin, its my first time to commenting anyplace,
when i read this post i thought i could also create comment due to
this sensible post.
جمعه 1396/02/22 11:38 ق.ظ
Terrific work! This is the type of information that should be
shared around the internet. Disgrace on the seek engines for
no longer positioning this submit upper! Come on over and discuss
with my web site . Thank you =)
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر


آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :