تبلیغات
کشاورزی نوین و پایدار - استخراج، خالص سازی و آنالیز هورمون های اکسین (IAA) و آبسیزیک اسید (ABA)
 
کشاورزی نوین و پایدار

به نظر من استخراج و خالص سازی هورمون ها یکی از سخت ترین، زمان بر ترین و در عین حال جذاب ترین آزمایش های فیزیولوژیک محسوب می شود. به یاد می آورم زمانی که در پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی کرج به اتفاق دوست عزیزم آقای دکتر محسن سعیدی کار بر روی هورمون ها را شروع کردیم روزها و هفته ها نتوانستیم آزمایشگاه را ترک کنیم، شاید برایتان عجیب باشد ولی عین واقعیت است! ضمن تشکر فراوان از استاد بزرگوارم جناب آقای دکتر فواد مرادی عضو محترم هیات علمی پژوهشکده و همچنین سرکار خانم مهندس مهشید رحیمی فرد، در زیر پروتکل اپتیمایز شده هورمون ها را می آورم.

 

آماده سازی محلول ها:

1. محلول استخراج: 25/0 گرمButylated hydroxytoluen و 5/0 گرم Sodium ascorbate (یا 44/0 گرم (Ascorbic acid در متانول 90% با درجه HPLC حل گردیده و به حجم یك لیتر رسانیده شد.

  1. بافر فسفات 5/0 مولار: 8 گرم NaCl، 2/0 گرمKH2PO4و 6/9 گرم Na2HPO4.12H2O در آب مقطر حل شده و به حجم یك لیتر رسید.
  2. پتاس 2/0 نرمال: 122/1 گرمKOH را در آب مقطر حل کرده و به حجم صد میلی­لیتر رسانیده شد.
  3. هیدروكلریك اسید 2/0 نرمال: 66/1 میلی لیتر HCl 37% با دانسیته Kg/L ۱/۱۹ را به آب مقطر افزوده و سپس به حجم صد میلی­­لیتر رسانیده شد.
  4. متانول

روش كار:

1. 2 گرم از ماده گیاهی تازه برداشته و با اضافه كردن ml ۴۰ محلول استخراج در هاون چینی خرد گردید.

2. نمونه­های خرد شده در تاریكی و دمایoC ۴به مدت حداقل 16 ساعت نگهداری شد تا عمل انحلال هورمون­ها به خوبی صورت گیرد.

  1. نمونه­های خرد شده راتوسط كاغذ صافی واتمن شماره 1 فیلتر نموده و بافت­های باقیمانده بر روی فیلتر سه بار توسط محلول استخراج شستشو گردید.
  2. متانول اضافی را توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ تبخیر کرده و سپس هم حجم محلول باقیمانده، بافر فسفات 5/0 مولار اضافه شد. سپس با اضافه كردن پتاس 2/0 نرمالpH محلول به 5/8 رسانیده شد.
  3. به محلول بدست آمده به میزان برابر اتیل­استات اضافه شد تا بخشی از ناخالصی­ها در آن حل شود. در این مرحله محلول دو فازی گردید. این محلول را ورتكس کرده و فاز بالایی (اتیل­استات) را دور ریخته شد و باقیمانده اتیل­استات توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ تبخیر شد.
  4. pH بخش آبكی را توسط هیدروكلریك اسید 2/0 نرمال به حدود 5/2 رسانده و دوباره به میزان برابر اتیل­استات اضافه گردید، با این تفاوت كه این بار فاز اتیل­استات نگه داشته ­شد.
  5. فاز اتیل­استات اسیدی را توسط دستگاه Freeze Dryer در دمای oC -۳۵ خشك شده بود و باقیمانده بلافاصله در ml ۰/۵ متانول حل نموده شد.
  6. نمونه را از فیلتر پلی­تترافلوئورواتیلن 45/0 عبور داده و سپس به ستون HPLC تزریق گردید.
  7. اجزای محلول بدست آمده توسط دستگاه HPLC با ستون C18، شدت جریان ml/min ۰/۷ و حلال استیك­اسید 2/0% و متانول 100% به نسبت 50 :50 در دمای oC ۴۰ جدا گردیدند.

شرایط آنالیز با HPLC :

دتکتور : UV

فاز متحرک : استیک اسید 2/0 درصد و متانول 100% (v/v 50:50 )

دمای ستون : 40 درجه سانتی گراد

نوع ستون : C18

شدت جریان : 7/0میلی لیتر در دقیقه

منبع:

حسیبی، پ. 1386. بررسی فیزیولوژیکی اثر تنش سرما در مرحله­ی گیاهچه­ای ژنوتیپ­های مختلف برنج. رساله دکتری دانشگاه شهید چمران اهواز. ص.145.





نوع مطلب :
برچسب ها :
لینک های مرتبط :
پنجشنبه 1397/09/15 11:21 ب.ظ

Thanks a lot. A good amount of content!

cialis generico postepay acquisto online cialis cialis online napol cialis e hiv best generic drugs cialis cialis patentablauf in deutschland cialis online nederland prices for cialis 50mg prix de cialis cialis super kamagra
چهارشنبه 1397/09/14 10:29 ق.ظ

Reliable knowledge. Regards.
cialis herbs cialis authentique suisse cost of cialis cvs comprar cialis navarr we use it 50 mg cialis dose acquisto online cialis does cialis cause gout cialis price in bangalore effetti del cialis can i take cialis and ecstasy
سه شنبه 1397/09/13 12:05 ب.ظ

You actually said that fantastically.
viagra vs cialis estudios de cialis genricos generic cialis pro how much does a cialis cost sialis canadian discount cialis achat cialis en suisse cialis kaufen wo generic cialis in vietnam cialis daily
سه شنبه 1397/09/13 12:30 ق.ظ

Very well voiced without a doubt! !
cialis kaufen wo cialis professional yohimbe safe dosage for cialis 5 mg cialis pharmacie en ligne side effects for cialis we choice free trial of cialis cilas ou trouver cialis sur le net click here take cialis preis cialis 20mg schweiz
دوشنبه 1397/09/12 11:33 ق.ظ

You explained this very well.
cialis online napol cialis side effects cialis 5mg billiger tadalafilo cialis super kamagra prix de cialis purchasing cialis on the internet cialis kaufen wo purchasing cialis on the internet generic cialis 20mg uk
دوشنبه 1397/09/12 12:06 ق.ظ

Thanks. Numerous advice.

we use it cialis online store cialis diario compra canada discount drugs cialis cialis 20mg estudios de cialis genricos cialis professional yohimbe safe site to buy cialis online cialis vs viagra generico cialis mexico order a sample of cialis
یکشنبه 1397/09/11 10:57 ق.ظ

You definitely made your point.
cialis australia org cialis kaufen cialis side effects dangers we like it cialis soft gel cialis wir preise cialis cipla best buy cialis generico milano click now cialis from canada weblink price cialis generico cialis mexico
شنبه 1397/09/10 10:53 ق.ظ

Thank you! I appreciate it!
cialis prices in england cialis 20mg preis cf cialis pills cialis farmacias guadalajara cilas click here cialis daily uk buy online cialis 5mg ou acheter du cialis pas cher cost of cialis cvs price cialis per pill
جمعه 1397/09/9 11:35 ب.ظ

Lovely information. Appreciate it!
buy cialis sample pack cialis generico postepay cialis 5 effetti collaterali buying brand cialis online cialis coupons where to buy cialis in ontario cialis efficacit price cialis wal mart pharmacy we use it 50 mg cialis dose click now buy cialis brand
جمعه 1397/09/9 12:32 ق.ظ

Thanks! Very good information.
online prescriptions cialis 200 cialis coupon cialis uk next day cialis cuantos mg hay we like it safe cheap cialis prezzo di cialis in bulgaria cialis patent expiration prezzo cialis a buon mercato rezeptfrei cialis apotheke cialis daily new zealand
پنجشنبه 1397/09/8 01:10 ب.ظ

Amazing a good deal of terrific information!
cialis professional from usa cialis italia gratis dosagem ideal cialis cialis dose 30mg cialis canada on line cialis authentique suisse wow cialis tadalafil 100mg cialis 5 mg schweiz cialis name brand cheap cialis manufacturer coupon
پنجشنبه 1397/09/8 12:46 ق.ظ

Reliable forum posts. Thanks!
cialis kaufen wo precios cialis peru click here cialis daily uk cialis 5 mg schweiz cialis australian price cialis 10mg prix pharmaci cialis kaufen acheter cialis kamagra low cost cialis 20mg preis cialis 20mg schweiz
چهارشنبه 1397/09/7 12:28 ب.ظ

Seriously a lot of superb data.
cialis vs viagra comprar cialis navarr only best offers 100mg cialis cialis generisches kanada look here cialis cheap canada cialis manufacturer coupon bulk cialis viagra cialis levitra generic cialis 20mg tablets cialis generique
چهارشنبه 1397/09/7 12:23 ق.ظ

Nicely put. Regards.
cialis 5 mg schweiz cialis generic cialis venta a domicilio acquisto online cialis cialis y deporte cialis super acti cialis 5 mg funziona cialis professional yohimbe cialis 5 mg schweiz cialis price thailand
چهارشنبه 1397/07/18 11:38 ب.ظ

Seriously loads of valuable tips!
buy levitra online levitra 20mg levitra 20 mg buy levitra 20 mg levitra 10 mg kopen vardenafil levitra without a doctor prescription buy levitra generic vardenafil buy levitra 20 mg
دوشنبه 1397/07/9 11:56 ب.ظ

Superb info, Kudos!
cialis en mexico precio cialis 5 mg para diabeticos costo in farmacia cialis cialis 20 mg cost cialis side effects dangers only best offers cialis use cialis kamagra levitra cialis prezzo in linea basso can i take cialis and ecstasy prices for cialis 50mg
جمعه 1397/07/6 06:19 ب.ظ

Nicely put, With thanks.
cialis without a doctor's prescription cialis generico look here cialis cheap canada cialis coupon free cialis cialis manufacturer coupon miglior cialis generico cialis coupons printable cialis prezzo in linea basso cialis australian price
پنجشنبه 1397/06/15 12:18 ق.ظ

Many thanks. Wonderful information.
purchasing cialis on the internet cuanto cuesta cialis yaho cialis preise schweiz cialis prices in england cialis coupons printable cialis for bph where to buy cialis in ontario cialis 100 mg 30 tablet cialis usa cost cialis pills
سه شنبه 1397/06/13 04:34 ب.ظ

You actually reported it exceptionally well.
canada online pharmacies for men canadian pharmacy viagra canadian pharmacies online prescriptions canadian pharcharmy online24 pharmacy canada 24 trusted pharmacy canada trusted pharmacy canada scam canadian pharmaceuticals stocks canadian online pharmacies rated canadian online pharmacies reviews
دوشنبه 1397/06/12 06:38 ب.ظ

Superb information. Thank you.
cialis rezeptfrei sterreich enter site very cheap cialis cost of cialis per pill ou acheter du cialis pas cher cialis for bph tadalafilo buy cialis online legal canadian discount cialis cialis super acti cialis ahumada
دوشنبه 1397/06/12 12:03 ق.ظ

Good knowledge. Cheers!
cialis billig try it no rx cialis cialis daily reviews cialis wir preise cialis for daily use free cialis ou acheter du cialis pas cher cialis tablets for sale cialis for sale cialis canada
سه شنبه 1397/05/23 02:29 ق.ظ

You definitely made the point!
buy super viagra online viagra usa rx viagra online usa online pharmacy sildenafil or viagra silagra buying viagra from canada where can i buy a viagra buy viagra now online buy viagra 50mg
یکشنبه 1397/05/21 07:45 ب.ظ

Awesome information. Appreciate it!
online cialis cialis authentique suisse cialis 10 doctissimo cialis 100 mg 30 tablet cialis super acti only here cialis pills cialis authentique suisse link for you cialis price we choice free trial of cialis side effects for cialis
دوشنبه 1397/03/7 01:29 ق.ظ

Cheers, Terrific stuff.
generic cialis 20mg uk cialis tadalafil online generic cialis review uk cialis 5 mg para diabeticos order generic cialis online cialis pills boards cialis 5 mg buy free generic cialis legalidad de comprar cialis cialis without a doctor's prescription
سه شنبه 1397/02/4 01:08 ق.ظ

Kudos. Plenty of material.

viagra buy uk buy generic viagra online safely viagra mail order buy viagra jelly viagra usa online buy viagra now buy viagra online online generic viagra pharmacy buy viagra canada online viagra cheap buy
جمعه 1397/01/17 05:25 ب.ظ

You actually suggested it effectively!
cialis 30 day trial coupon free cialis overnight cialis tadalafil cialis canada cialis 5mg prix cialis professional from usa cialis e hiv cialis generico milano low cost cialis 20mg buy generic cialis
جمعه 1397/01/3 12:45 ب.ظ

Terrific material. Thanks!
can i take cialis and ecstasy we recommend cialis info low dose cialis blood pressure buy cialis cialis 100 mg 30 tablet cialis rezeptfrei sterreich cialis wir preise if a woman takes a mans cialis cialis prezzo di mercato where do you buy cialis
یکشنبه 1396/12/27 08:07 ب.ظ

Reliable knowledge. Appreciate it!
cialis cuantos mg hay venta de cialis canada link for you cialis price click now buy cialis brand cialis 5 mg generico cialis mexico cialis et insomni cialis with 2 days delivery cialis tadalafil online we use it cialis online store
جمعه 1396/09/17 05:32 ق.ظ
Hey there! This is kind of off topic but I need some guidance from an established
blog. Is it very hard to set up your own blog? I'm not very techincal but I can figure things
out pretty fast. I'm thinking about creating my own but I'm
not sure where to begin. Do you have any points or suggestions?
With thanks
دوشنبه 1396/06/27 05:15 ق.ظ
Hello There. I found your blog the usage of msn. That is a really smartly written article.
I will be sure to bookmark it and come back to read extra
of your helpful info. Thanks for the post. I will definitely comeback.
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر


نمایش نظرات 1 تا 30
آمار وبلاگ
  • کل بازدید :
  • بازدید امروز :
  • بازدید دیروز :
  • بازدید این ماه :
  • بازدید ماه قبل :
  • تعداد نویسندگان :
  • تعداد کل پست ها :
  • آخرین بازدید :
  • آخرین بروز رسانی :